Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中所逐渐扩展

从第一次浮现肝细胞自身免疫反应到浮现1改型白血病诊疗症状的重大突破赴援在成人时期就有很好的阐述，多个肝细胞自身免疫反应无症状的成人中所有70%在血清类比后10年中中所风白血病，而随访15年的成人这一比率减低到84%。尤其于之下，九成诊疗1改型白血病一半以上的改型1改型白血病的发病机制还不会想得到不够好的研究工作。

越来越多的人开始应用于分段子系统来度量1改型白血病的重大突破：幼体在浮现多种肝细胞自身免疫反应时进入第1过渡期，浮现高血压异常时进入第2过渡期，浮现症状时进入第3过渡期。一些多发肝细胞自身免疫反应无症状的幼体，在1期和2期，重大突破极快，并发展为发病的1改型白血病。我们在此之后阐述了一四组在首次测定到多种肝细胞自身免疫反应样本后非常少10年无白血病的极迟重大突破者，这四组病人人数少，但外观上非常明确。随后，我们发现肝细胞自身抗原特异性CD8+T肝细胞质子化在重大突破平稳的病人中所基本不存在，但在近期发病和则有的白血病病人中所很容易测定到。这可能确实，与重大突破病人尤其于，这些病人自身免疫质子化的闭环加强。

不够早研究工作确实，尽管闭环性T肝细胞(Treg)使用量也就是说，但白血病病人存在一些子系统缺陷，其中所最主要对IL-2的质子化能力也降低。此外，白血病病人中所的不稳定性CD4+T肝细胞可能对闭环不够具抵抗性，表现为不稳定性T肝细胞的诱导减弱，自然消除的Treg和体外消除的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T肝细胞中所IL-2质子化减弱。本研究工作的目地是阐述了CD4+闭环性T肝细胞(Treg)在一个大极平稳重大突破者中所的外观上，他们的平均年长为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以群体为基础的纵向研究工作，在21岁此表确诊的病人家庭成员中所检查1改型白血病的危险因素。我们在此之后阐述了长期平稳重大突破者的外观上，他们依然多重肝细胞自身免疫反应无症状超过10年，但不会浮现白血病的诊疗症状，迟性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名再次依然无白血病并愿意缺少大量血液样本的平稳重大突破者划入T和B肝细胞子系统归纳。在目前的研究工作中所，8名迟重大突破者(SP四组)，中所位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的肝细胞自身免疫反应无症状。所有的与会者都处于1改型白血病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身免疫反应对某些抗原的无症状质子化，然而，一名病人已经处于2期非常少6年，但不会浮现诊疗症状，一名病人被诊断为白血病，该受试者72岁，在挖掘成实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中所对该NADPH顺利完成了分开评估。复合外周血单个核能肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞奥义和T肝细胞诱导测试评估NADPH中所Treg的频赴援、表改型和子系统。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)顺利完成无督导聚类归纳，评估Treg表改型。

结果：与有益NADPH尤其于，来自迟重大突破体的无意识CD4+T肝细胞的督导聚类看成，此番的无意识CD4+ Treg频赴援减低，与糖皮质激素诱导的TNFR系统性抗原(GITR)暗示减低有关。一名HbA1c升高的病人与重大突破平稳者和匹配的折衷四组尤其于，Treg谱有所不同。子系统归纳确实，与有益NADPH尤其于，来自平稳重大突破体的Treg介导的CD4+不稳定性T肝细胞诱导引人注意受损。表现为对不稳定性CD4+T肝细胞CD25和CD134暗示的诱导减低。

左图1 侧重的表改型归纳看成，CD4+Treg亚改型在迟重大突破链表中所减低。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据记号物暗示解剖成10个元簇:无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)应用于9个不同Treg记号分解成的10个元簇的MST。每个键值值得一提的是一个坦克部队(100个坦克部队)，不够大的元坦克部队(10个元坦克部队)在键值四组周围上色。每个键值中所的面包左图问到单个记号的暗示级别。(b)每个元聚类的热左图，以看成连续性记号暗示。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)分解成左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的表层。(e-l)尤其金属量为每个metacluster装有中所央线左图(金属量> 0.05%)确认为HD和SP四组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T肝细胞(l)。橙色圆圈值得一提的是捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 应用于CITRUS的预测模改型证实，Treg频赴援的减低是重大突破平稳的徽章。分级制度依赖改型(a - f)和柑橘归纳(g-k)尤其SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的值得一提的是性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示顺利完成复合，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)四组以及NADPHSP 606(橙色)中所CD25+ cd127的频赴援综合左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖改型邻域的装有中所央线左图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度填充，斜线醒目地簇被识别为SP和HD链表彼此间的不同。(j)装有中所央线左图看成了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组中所，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的尤其金属量(比率)。(k)直方左图看成每个簇的表改型(粉红色)和Treg记号尤其暗示与背景暗示(红色);上列，CPUTreg_3;下面动身，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中所记号的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

左图3 与有益献血者尤其于，重大突破平稳者无意识treg的GITR减低。每个无意识CD4+T肝细胞元簇(无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个暗示记号的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的暗示热左图(sp606不最主要在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR暗示串联，看成直方左图(c)和综合左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橙色)所有NADPH最主要，p< 0.05(红色)NADPHSP 606和匹配的HD不最主要在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR暗示，从分级制度依赖改型，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(橙色)串联，看成直方左图(e)和综合左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

左图4 来自平稳重大突破的CD4+ treg肝细胞依靠不稳定性CD4+T肝细胞的能力也降低。SP四组用红色的中所央线和圆圈问到，HD四组用黑色的中所央线和圆圈问到，橙色的中所央线/圆圈问到NADPHsp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(此番者)被记号为CFSE, Treg按仔细观察的比率硫酸铜。用抗CD3 /28微珠活化肝细胞，培育成3几天后顺利完成流式肝细胞奥义测定。(a-d)与CD4+此番者尤其应的treg培育成(骨髓)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培育成。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE诱导倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导倍数。应用于无症状折衷(此番的响应肝细胞分别为treg)量化诱导倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

左图5 不稳定性CD4+T肝细胞对平稳重大突破的T肝细胞活化的诱导不够敏感。SP四组用红色的中所央线和圆圈问到，HD四组用黑色的中所央线和圆圈问到，橙色的中所央线/圆圈问到NADPHsp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel记号，treg按仔细观察的比率硫酸铜。用抗CD3 /28微珠活化肝细胞，培育成3几天后顺利完成流式肝细胞奥义(CD25反染)和肝细胞因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606此番者主导培育成。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE诱导百分赴援(b)。(c,d) CD25诱导百分赴援(c)和CD134诱导百分赴援(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育成中所的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

结论：我们证明了的结论是，来自平稳重大突破子的活化无意识CD4+Treg在GITR暗示中所想得到了扩展和丰富多彩，强调了进一步研究工作Treg在1改型白血病效用幼体中所的表型的全面性。

原文成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28